快速找到适合您的色谱柱
根据样品特性、流动相条件或应用场景，三种方式帮您锁定最合适的型号。
按 pH 条件选柱
| 流动相 pH | 推荐色谱柱 | 说明 |
|---|---|---|
| pH 2 – 8（通用） | 5C18A | 标准反相色谱，覆盖大多数应用场景 |
| pH 1.5 – 12（苛刻） | 5C18C | 耐强酸强碱，NaOH 可再生，化工/制药强酸碱体系 |
| 接近纯水（高水相） | 5C18D / Ami C18 | C18 链不塌陷，亲水性化合物强保留 |
| 高有机相（HILIC） | HILIC 柱 | 70–95% 乙腈流动相，极性化合物分离 |
| pH 1 – 14（全范围） | 聚合物介质 | 完全耐受强酸强碱，无硅胶溶出 |
按检测器选柱
| 检测器 | 推荐色谱柱 | 注意事项 |
|---|---|---|
| UV / DAD | 5C18A / 5C18C / 5C18D | 通用，确保流动相在检测波长透明 |
| 荧光（FLD） | 5C18D + 衍生化试剂盒 | 氨基酸手性分析，OPA/FMOC 衍生 |
| 示差折光（RI） | SUGAR-Ca / SUGAR-H / Shodex | 等度洗脱，不可用梯度，糖类/聚合物首选 |
| 质谱（MS） | 5C18D / HILIC / Ami C18 | 避免非挥发性缓冲盐，禁用磷酸盐 |
| 蒸发光散射（ELSD） | 5C18A / NH PLUS | 流动相须完全挥发，无需紫外吸收 |
FAQ — 最常见的 20 个问题
色谱分析中遇到的典型疑问，点击展开详细解答。
色谱柱选型
使用与操作
性能与寿命
流动相与方法
色谱柱正确使用与日常维护
良好的使用习惯是延长色谱柱寿命的关键，以下规范帮助您最大化柱使用寿命。
安装步骤
① 检查方向 — 确认柱头箭头与流动相流向一致，切勿反装。
② 接头连接 — 使用适配的接头螺帽，手拧紧后再用扳手拧 1/4 圈，不要过力，避免损坏柱头密封面。
③ 低流速平衡 — 安装后先以 0.2 mL/min 低流速冲洗 5 min，确认接头无渗漏，再恢复正常流速。
④ 柱平衡 — 用初始流动相平衡至少 10–15 倍柱体积，基线稳定后再进样。
日常维护规范
| 操作场景 | 推荐步骤 |
|---|---|
| 每次实验后 | 5–10 倍柱体积水/有机相混合液冲洗，去除残留样品和缓冲盐 |
| 含缓冲盐时 | 先低有机相（5%）冲洗 → 逐步提高至 50% → 纯有机相保存 |
| 短期停用（<3天） | 两端旋塞封堵，保留流动相（无盐），室温保存 |
| 长期停用（>3天） | 纯甲醇冲洗后密封，室温或 4°C 冷藏（勿冷冻） |
| 反相柱再生 | 异丙醇高流速冲洗 20 min，去除强吸附物质 |
| C18C 碱再生 | 0.1 mol/L NaOH 低流速冲洗 10 min，再用水冲洗至中性 |
延长柱寿命的关键措施
① 样品前处理
所有样品进柱前必须过 0.22 μm 针式过滤器。血浆、血清、食品提取物等复杂基质建议先经 SPE 净化，去除蛋白质、脂质等强吸附杂质。
② 安装保护柱
保护柱串联于进样器和分析柱之间，填料与分析柱一致。牺牲保护柱保护分析柱，柱芯可单独更换，成本远低于分析柱。
③ 控制流动相 pH
标准 C18A 柱在 pH 2–10 范围内使用；严格酸碱条件选 C18C（pH 1.5–12）；避免在 pH 限制范围外长时间使用，会加速硅胶基质水解。
④ 控制温度
推荐使用柱温箱，保持温度恒定（通常 25–40°C）。温度波动会导致保留时间漂移。温度不超过 60°C（硅胶基质），聚合物介质耐温更高。
HPLC 方法开发系统性指南
从初始条件筛选到方法优化，按步骤建立稳健的 HPLC 分析方法。
第一步：选择分离模式
| 化合物特性 | 分离模式 | 推荐色谱柱 |
|---|---|---|
| 非极性 ~ 中极性 | 反相（RP-HPLC） | 5C18A / 5C18C |
| 亲水 / 极性（高水相） | 反相（亲水型） | 5C18D / Ami C18 |
| 极性代谢物 | 亲水作用（HILIC） | HILIC 柱 |
| 糖类 / 有机酸 | 离子排斥 / 配体交换 | SUGAR-Ca / SUGAR-H / NH PLUS |
| 蛋白质 / 聚合物 | 凝胶排阻（SEC/GPC） | Shodex SEC / GPC 系列 |
| 非极性正相 | 正相（NP-HPLC） | SIL 硅胶柱 |
第二步：初始流动相条件
反相色谱初始推荐条件
有机相：乙腈（UV 截止波长低，MS 兼容）或甲醇（选择性不同）
水相：0.1% 甲酸水（pH ≈ 2.7）或 10 mM 醋酸铵水（pH ≈ 4.7）
初始有机相比例：从 10% 开始，梯度至 90%，观察所有峰的出峰情况
流速：分析柱 1.0 mL/min（4.6 mm ID），半制备 3–5 mL/min（10 mm ID）
柱温：30–40°C（提高分离度，降低背压）
第三步：优化分离度
| 调节参数 | 效果 | 建议调节幅度 |
|---|---|---|
| 降低有机相比例 | 增加保留时间，提高分离度 | 每次 ±5% |
| 升高柱温 | 降低粘度，提高分离速度，改善峰形 | ±5°C |
| 调整流动相 pH | 改变离子化程度，改善拖尾 | ±0.5 pH 单位 |
| 更换有机相 | 甲醇↔乙腈，改变选择性 | 整体替换 |
| 延长梯度时间 | 提高相邻峰分辨率 | 延长 5–10 min |
| 更换柱型 | 根本性改变选择性 | C18→苯基→HILIC |
第四步：方法验证关键指标
| 验证项目 | 判断标准 | 对应 ICH 要求 |
|---|---|---|
| 系统适用性 | 理论塔板数 N ≥ 2000，拖尾因子 0.8–1.5 | 方法建立前 |
| 线性 | R² ≥ 0.999，至少 5 个浓度点 | ICH Q2 R1 |
| 精密度 | 日内 RSD < 2%，日间 RSD < 5% | ICH Q2 R1 |
| 准确度 | 回收率 98–102%（标准品），95–105%（样品） | ICH Q2 R1 |
| 检测限（LOD） | S/N ≥ 3 | ICH Q2 R1 |
| 定量限（LOQ） | S/N ≥ 10 | ICH Q2 R1 |
10 类常见色谱问题 · 原因与解决
遇到峰形异常、压力问题或基线噪音，对号入座快速定位原因。
可能原因
- 柱头干枯或空洞（最常见）
- 筛板堵塞导致流速分布不均
- 进样量过大（超过柱容量）
- 进样溶剂与流动相不匹配
- 柱外死体积过大（接头问题）
解决方法
- 更换保护柱芯，观察是否改善
- 强溶剂（异丙醇）冲洗再生，去除堵塞物
- 减少进样量（分析柱通常 < 10 μg）
- 进样溶剂改用弱溶剂（初始流动相）
- 检查所有接头，减少死体积
可能原因
- 碱性化合物与残余硅羟基相互作用
- 流动相 pH 未抑制碱性化合物离子化
- 柱头污染或损坏
- 进样溶剂强度过高
解决方法
- 流动相中加入三乙胺（TEA）0.1% 封盖硅羟基
- 降低流动相 pH（pH < pKa – 2），抑制碱性基团质子化
- 改用封端更完全的色谱柱（HPLCONE 完全封端）
- 用弱溶剂溶解样品
可能原因
- 柱头出现空洞（柱头坍塌）
- 进样溶剂强度远高于流动相
- 柱内填料开裂
解决方法
- 目视检查柱头：取下端头，观察填料是否有空洞；有空洞说明柱头损坏，需更换
- 改用弱溶剂（与初始流动相相似或更弱）溶解样品
- 若填料开裂，柱子需要更换
可能原因
- 柱头筛板被颗粒物堵塞
- 缓冲盐结晶析出
- 蛋白质、脂质在柱头沉积
- 流动相粘度过大（纯甲醇低温）
- 管路堵塞（非柱本身问题）
解决方法
- 先拆下色谱柱，检查系统背压是否下降；若下降，问题在柱
- 异丙醇高流速冲洗 20 min
- 更换保护柱芯或进口端筛板
- 检查样品前处理，确保 0.22 μm 过滤
- 升温（40°C）降低甲醇粘度
可能原因
- 管路接头松动或破裂泄漏
- 泵问题（单向阀损坏）
- 柱内填料流失（筛板破损）
解决方法
- 检查所有接头是否有液体渗漏
- 检查泵压力是否稳定（更换单向阀球）
- 若填料流失，检查出口端筛板是否完好
可能原因
- 流动相中有气泡
- 检测器灯老化（氘灯寿命到期）
- 流动相未充分脱气
- 梯度洗脱时有机相比例变化
- 色谱柱未充分平衡
解决方法
- 流动相用超声脱气 15 min，或在线脱气
- 检查氘灯能量值，低于阈值时更换（可更换我司兼容氘灯）
- 梯度方法先跑空白梯度，记录基线背景
- 延长平衡时间至 20–30 倍柱体积
可能原因
- 前次进样残留（交叉污染）
- 样品溶剂中含杂质
- 流动相中含微量吸收杂质
- 进样阀污染
解决方法
- 延长冲洗时间，或用强溶剂冲洗进样阀
- 检查样品溶剂空白是否干净
- 流动相改用 HPLC 级试剂
- 进样阀用异丙醇冲洗
可能原因
- 柱温不稳定
- 流动相配比不一致
- 色谱柱未充分平衡
- 泵流速不稳定
解决方法
- 使用柱温箱，固定柱温
- 精确配制流动相，使用容量瓶定容
- 每次进样前用至少 10 倍柱体积平衡
- 校准泵流速
可能原因
- 进样量不准确（进样器问题）
- 检测器灯能量不足
- 样品在进样器中损失（吸附）
- 样品浓度计算错误
解决方法
- 校验进样器进样量（用已知浓度标准品）
- 检查并更换检测器氘灯
- 更换 PEEK 进样管路，减少吸附
- 重新配制标准品验证浓度
可能原因
- 样品溶剂吸收值低于流动相（负峰）
- 溶剂折射率差异（RI 检测器）
- 进样量过大导致系统峰
解决方法
- 改用与流动相相近的溶剂溶解样品
- 减少进样量
- RI 检测器更换参比池流动相，与样品流动相一致
产品规格书与技术资料
提供色谱柱规格书、填料 CoA 样本、代理品牌产品目录等技术文档，点击联系获取正式版本。
HPLCONE 自研产品
5C18A 色谱柱规格书
含填料参数、pH 范围、规格型号对照
5C18C / 5C18D 规格书
耐酸碱型和亲水型色谱柱完整参数
SILICAONE 硅胶填料 CoA 样本
粒径分布、比表面积、孔容、金属杂质数据
SUGAR-Ca/H 蜂蜜柱使用手册
含蜂蜜糖类分析方法和参考色谱图
氨基酸手性检测试剂盒操作手册
OPA/FMOC 衍生化步骤与色谱条件
装柱机操作手册
装柱步骤、参数设置、维护说明
代理品牌资料
色谱参数在线计算器
常用色谱参数快速计算，方法开发和放大纯化时使用。
🧪 柱体积计算器
计算色谱柱空体积，用于确定冲洗体积、死时间等参数。
⚗ 分析柱 → 制备柱流速放大
保持线速度不变，计算制备柱所需流速。
📊 理论塔板数 N 计算
评价色谱柱柱效，系统适用性测试关键指标（要求 N ≥ 2000）。
📐 分离度 Rs 计算
评价两个相邻峰的分离程度，Rs ≥ 1.5 为基线分离。
典型应用案例与参考文献
按行业分类整理的代表性色谱应用案例，供方法开发参考。
制药与生物制药
GLP-1 类多肽原料药制备级纯化方法建立
采用 HPLCONE 5C18A 制备柱（20×250mm），TFA/乙腈梯度体系，实现司美格鲁肽粗品纯化至 >99%，单次批次收率 >85%。
强碱性流动相条件下头孢类抗生素杂质检测
利用 5C18C 在 pH 11 氨水/乙腈体系中的稳定性，对头孢噻肟中 5 种降解杂质同时检测，使用 NaOH 再生后柱效恢复 >98%。
单克隆抗体聚集体分析（SEC-HPLC）
Shodex KW-803 凝胶色谱柱，PBS 流动相（pH 6.8），30 min 内完成 mAb 单体、二聚体、多聚体的分离定量，方法精密度 RSD <1.5%。
食品检测
蜂蜜中 6 种糖类同时测定 — 离子色谱法
SUGAR-Ca 柱（8×300mm），纯水流动相 75°C 等度洗脱，RI 检测器，30 min 内完成葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、松三糖、棉子糖定量，可区分天然蜂蜜与掺糖蜂蜜。
蔬菜中 25 种有机磷农药残留 QuEChERS-HPLC 方法
SPE C18 小柱净化蔬菜提取液，5C18A（4.6×150mm）反相分离，DAD 检测，25 种有机磷农药在 25 min 内完成检测，LOQ 均 <0.01 mg/kg。
生命科学与 LC-MS
血清代谢组学双平台分析方法
HILIC 柱覆盖极性代谢物（氨基酸、核苷酸、有机酸），5C18D 覆盖中等极性代谢物（脂肪酸、磷脂），两平台互补，血清样品中代谢物检测总数 >800 种，均无需离子对试剂，直接 ESI-MS 检测。
蛋白水解物中 D-氨基酸含量测定
OPA/FMOC 柱前衍生化，5C18D（4.6×150mm）荧光检测，45 min 内完成 20 种氨基酸 D/L 对映体分离，方法精密度 RSD <3%，适用于多肽原料药质量控制。
操作演示视频
覆盖色谱柱安装、装柱操作、系统适用性测试等核心操作步骤，即将上线。
HPLC 色谱柱正确安装步骤
接头选择、安装方向、初始平衡全流程演示
装柱机操作演示 — 制备柱自装
填料装填、压力控制、柱效验证全过程
系统适用性测试（SST）操作
塔板数、拖尾因子、重现性测试方法演示
蜂蜜糖类检测 — SUGAR-Ca 柱操作
样品制备、进样条件、数据处理演示
氨基酸手性检测试剂盒使用教程
OPA/FMOC 衍生化步骤和进样方法
氘灯更换操作指南
主流 HPLC 检测器氘灯更换演示
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有助于快速解决问题的信息
• 色谱柱型号和批号（标签上可找到）
• 仪器型号（品牌、型号、检测器类型）
• 流动相组成和流速（pH、有机相比例、缓冲盐）
• 问题描述（峰形异常、压力问题、保留时间变化）
• 色谱图（正常图和问题图对比，最直观）
• 样品类型（基质复杂程度、是否有前处理）
公司地址
📍 苏州工业园区 星湖街 218 号，江苏省苏州市 215028